綠色熒光蛋白GFP的內(nèi)源熒光活性和能用來與其他蛋白構(gòu)建融合蛋白的能力使它成為了一個(gè)以及體內(nèi)生物過程的寶貴工具。如果它們能通過光激活來選擇性的標(biāo)記蛋白，那么它們的價(jià)值就會更大了，Patterson and Lippincott-Schwartz在science上發(fā)表的文章以及實(shí)現(xiàn)了這個(gè)目標(biāo)。他們的構(gòu)思非常巧妙，讓GFP保持在關(guān)閉的狀態(tài)，直到被激活。 GFP通常存在兩種形式，中性形式和陰離子形式，分別具有主要的和次要的吸收峰。持續(xù)的400nm光能將GFP主要轉(zhuǎn)變?yōu)殛庪x子形式，導(dǎo)致次要吸收峰的增加，在488納米激發(fā)后熒光增加3倍。Patterson and Lippincott-Schwartz決定尋找一種減弱次要吸收峰的GFP突變體。他們希望如果存在這種突變體，就可以用400nm的光來進(jìn)行GFP形式轉(zhuǎn)變，從而導(dǎo)致488nm激發(fā)后發(fā)射波長的改變。研究者*終找到了這種突變體PA－GFP，203位氨基酸用組氨酸替代，在次要吸收峰幾乎沒有吸收，被400nm進(jìn)行照射后，次要波長吸收大大增加。他們還發(fā)現(xiàn)PA－GFP光轉(zhuǎn)變后488nm激發(fā)導(dǎo)致了熒光釋放100倍的增強(qiáng)。 那么這種PA－GFP對活體細(xì)胞的研究有什么用處呢？研究者分析了表達(dá)PA－GFP的細(xì)胞，他們分析不同于野生型GFP，488nm激發(fā)在光轉(zhuǎn)換之前產(chǎn)生出非常少的熒光信號，而在光轉(zhuǎn)換后，488nm激發(fā)導(dǎo)致了60倍的發(fā)射增加，野生型的GFP只有2.6倍的熒光增強(qiáng)。 這個(gè)新的技術(shù)突破必將為分子生物學(xué)體內(nèi)研究帶來新的進(jìn)展。 　 相關(guān)文章及鏈接： ORIGINAL RESEARCH PAPERS Patterson, G. H. & Lippincott-Schwartz, J. A photoactivatable GFP for selective photolabelling of proteins and cells. Science 297, 1873-1877 (2002) | Article | PubMed |