Biocolor 可溶性膠原檢測(cè)試劑盒
采用與膠原特異性結(jié)合的Sircol染料，主要用于定量檢測(cè)哺乳動(dòng)物組織中抽提的酸溶性膠原和體外培養(yǎng)哺乳動(dòng)物細(xì)胞釋放到培養(yǎng)基中的膠原。
溶于酸、胃蛋白等的可溶性膠原均可檢測(cè)，具體可檢測(cè)的膠原類(lèi)型為I-V型，VI-XIV型膠原也可檢測(cè)，但由于難以制備標(biāo)準(zhǔn)曲線，還無(wú)法定量。Sircol染料不能區(qū)分不同類(lèi)型的膠原，但可與膠原的[Gly-X-Y]n螺旋結(jié)構(gòu)特異性地結(jié)合。隨著膠原變性為凝膠，該染料與膠原的結(jié)合力減弱。非脊椎動(dòng)物與膠原由于變性溫度較低、羥脯氨酸殘基較少等原因，結(jié)合染料的能力較弱，需要制備種屬特異性的純化標(biāo)準(zhǔn)品，以繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
1.繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線
Product Code: S1000 110 assays
Product Code: S5000 440 assays
Biocolor Sircol Soluble Collagen Assay
實(shí)驗(yàn)步驟
2.待測(cè)樣本的制備：取50ul樣本容易調(diào)整體積到100ul進(jìn)行反應(yīng)。根據(jù)反應(yīng)的結(jié)果對(duì)樣本濃度進(jìn)行調(diào)整，使其在標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍內(nèi)；
3.膠原—染料復(fù)合物的獲得：加入1ml Sircol染料，混勻離心后，既得膠原—染料復(fù)合物，棄 上清，去掉未結(jié)合的染料
4.加入1ml 染料釋放劑，將膠原—染料復(fù)合物中的染料釋放出來(lái)
5.吸光度測(cè)定：用分光光度計(jì)540nm出定量測(cè)定。或使用colorimeter測(cè)定
產(chǎn)品訂購(gòu)
可溶性膠原檢測(cè)試劑盒常見(jiàn)問(wèn)題：
問(wèn)：可溶性膠原檢測(cè)試劑盒（S1000，Sircol Soluble Collagen Assay）的靈敏度?答：≥1.0μg的膠原。如果樣本中的膠原含量很低，可參考protocol，進(jìn)行膠原的分離和富集，有詳細(xì)的膠原富集步驟，見(jiàn)第5頁(yè)；
問(wèn)：使用可溶性膠原檢測(cè)試劑盒（S1000，Sircol Soluble Collagen Assay）檢測(cè)膠原所需時(shí)間？
答：1.5小時(shí)左右；
問(wèn)：可溶性膠原檢測(cè)試劑盒（S1000）可檢測(cè)到的膠原樣式？
答：酸可溶性或胃蛋白酶可溶性膠原；
問(wèn)：可溶性膠原檢測(cè)試劑盒（S1000）可檢測(cè)到的膠原類(lèi)型？
答：哺乳動(dòng)物膠原 I-V型；
問(wèn)：樣品檢測(cè)的吸光度值？
答：一般來(lái)說(shuō)，520-570nm處檢測(cè)均可，555nm處會(huì)獲得*大吸收光譜；
問(wèn)：如何準(zhǔn)備樣品進(jìn)行可溶性膠原檢測(cè)？
答：無(wú)論是細(xì)胞培養(yǎng)物或者是組織樣本，都有詳細(xì)的準(zhǔn)備步驟，詳見(jiàn)protocol第3-4頁(yè)
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