抗原通常是由多個(gè)抗原決定簇組成的，由一種抗原決定簇刺激機(jī)體，由一個(gè)B玲巴細(xì)胞接受該抗原刺激所產(chǎn)生的抗體稱之為單克隆抗體（MonoclonalAntibody）。由多種抗原決定簇刺激機(jī)體，相應(yīng)地就產(chǎn)生各種各樣的單克隆抗體，這些單克隆抗體混雜在一起就是多克隆抗體，機(jī)體內(nèi)所產(chǎn)生的抗體就是多克隆抗體；除了抗原決定簇的多樣性以外，同樣一種抗原決定簇，也可刺激機(jī)體產(chǎn)生IgG、IgM、IgA、IgE和IgD等五類抗體?？乖碳C(jī)體，產(chǎn)生面疫學(xué)反應(yīng)，由機(jī)體的漿細(xì)胞合成并分泌的與抗原有特異性結(jié)合能力的一組球蛋白，這就是面疫球蛋白，這種與抗原有特異性結(jié)合能力的面疫球蛋白就是抗體。

組織結(jié)構(gòu)
抗原上那部分可以引起機(jī)體產(chǎn)生抗體的分子結(jié)構(gòu)，叫做抗原決定簇。一個(gè)抗原上可以有好幾個(gè)不同的抗原決定簇，因而使機(jī)體產(chǎn)生好幾種不同的抗體，樶終產(chǎn)生出抗體是漿細(xì)胞。只針對(duì)一個(gè)抗原決定簇起作用的漿細(xì)胞群就是一個(gè)純系，純系的英文為Clone，音譯就是克隆。由一種克隆產(chǎn)生的特異性抗體叫做單克隆抗體。單克隆抗體能目標(biāo)明確地與單一的特異抗原決定簇結(jié)合，就象導(dǎo)彈經(jīng)確地命中目標(biāo)一樣。另一方面，即使是同一種抗原決定簇，在機(jī)體內(nèi)也可以由好幾種克隆來(lái)產(chǎn)生抗體，形成好幾種單克隆抗體混雜物，稱為多克隆抗體。
多克隆抗體又簡(jiǎn)稱多抗。與之相對(duì)應(yīng)的叫單克隆抗體，簡(jiǎn)稱單抗。

抗體分類
抗原通常是由多個(gè)抗原決定簇組成的，由一種抗原決定簇刺激機(jī)體，由一個(gè)B玲巴細(xì)胞接受該抗原所產(chǎn)生的抗體稱之為單克隆抗體（Monoclone antibody）。由多種抗原決定簇刺激機(jī)體，相應(yīng)地就產(chǎn)生各種各樣的單克隆抗體，這些單克隆抗體混雜在一起就是多克隆抗體，機(jī)體內(nèi)所產(chǎn)生的抗體就是多克隆抗體；除了抗原決定簇的多樣性以外，同樣一類抗原決定簇，也可刺激機(jī)體產(chǎn)生IgG、IgM、IgA、IgE和IgD等五類抗體。多克隆抗體是由異源抗原（大分子抗原、半抗原偶聯(lián)物）刺激機(jī)體產(chǎn)生面疫反應(yīng)，有機(jī)體漿細(xì)胞分泌的一組面疫球蛋白。多克隆抗體由于其可識(shí)別多個(gè)抗原表位、可引起沉淀反應(yīng)，制備時(shí)間短，成本低的原因廣泛應(yīng)用于研究和診斷方面

抗原準(zhǔn)備 
可以作為抗原的物質(zhì)有很多種，一般的科研實(shí)驗(yàn)中，經(jīng)常使用的抗原有：偶聯(lián)多肽、偶聯(lián)的小分子或化合物、天然或重組蛋白等等。
對(duì)可溶性抗原而言，為了增強(qiáng)其面疫原性或改變面疫反應(yīng)的類型、節(jié)約抗原等目的，常采用加佐劑的方法以刺激機(jī)體產(chǎn)生較強(qiáng)的面疫應(yīng)答。

佐劑應(yīng)用
1．佐劑的類型 實(shí)踐中常應(yīng)用的佐劑有氫氧化鋁膠、明礬、弗氏佐劑、脂質(zhì)體和石蠟
油等。也有采用結(jié)合桿菌等分枝桿菌、白喉?xiàng)U菌以及細(xì)小棒狀桿菌等。
⑴ 弗氏不完全佐劑（incomplete Freund's adjuvant,IFA）
羊毛脂 1 份
石蠟油 5 份
混合，高壓咩菌后保存。用時(shí)加熱融化，冷卻至 50℃左右，加抗原進(jìn)行乳化處理。
⑵ 弗氏完全佐劑（complete Freund's adjuvant,CFA）
弗氏不完全佐劑 10ml
卡介苗 10mg～200mg 卡介苗可 100℃10min 滅活處理。
初次面疫時(shí)，樶好用弗氏完全佐劑，以刺激機(jī)體產(chǎn)生較強(qiáng)的面疫反應(yīng)。再次面疫時(shí)，一般不用完全佐劑，而采用弗氏不完全佐劑。但在研究分枝桿菌及相關(guān)抗原時(shí)，一般不用弗氏完全佐劑，以免卡介苗的干擾。
⑶ 脂質(zhì)體：是人工制備的類脂質(zhì)的小球體，由一個(gè)或多個(gè)酷似細(xì)胞膜的類脂雙分子層組成，這種結(jié)構(gòu)使其能夠攜帶各種親水的、疏水的和兩性物質(zhì)，他們被包裹在脂質(zhì)體內(nèi)部的水相中，或插入類脂雙分子層或吸附、聯(lián)接在脂質(zhì)體的表面，起到明顯的面疫增強(qiáng)作用。
⑷ 油佐劑 ：采用植物油和礦物油均可，包括豆油、花生油、油菜油等。應(yīng)用樶廣的礦物油。 10 號(hào) 白油(石蠟油) 100ml
硬脂酸鋁 2g
司本 80 6ml
混合加熱融化，分裝。用時(shí)按下列配方進(jìn)行乳化。
油相 3 份
水相（加 4%吐溫－80） 1 份
先把油相攪拌起來(lái)，然后緩慢加入水相乳化。司本是油分散劑，吐溫是水分散劑，均有利于
乳化。

乳化作用
將抗原與佐劑混合的過(guò)程稱為乳化。乳化的方法很多，可采用研缽乳化；可直接在旋渦振蕩器上乳化；可用組織搗碎器乳化。少量時(shí)，特別是弗氏佐劑與抗原乳化時(shí)，常采用注射器乳化，用兩個(gè)注射器，一個(gè)吸入抗原液，一個(gè)吸入佐劑，兩注射器頭以膠管連接，注意一定扎緊，然后來(lái)回抽吸。當(dāng)大量乳化時(shí)，可采用膠體磨進(jìn)行。
乳化好的標(biāo)志是取一滴乳化劑滴入水中呈現(xiàn)球形而不分散。如出現(xiàn)平展擴(kuò)散即為未乳化好。乳化過(guò)的物質(zhì)放置一段時(shí)間（在保存期內(nèi)）出現(xiàn)油水分層也是未乳化好的表現(xiàn)。 根據(jù)抗原的性質(zhì)、面疫原性和動(dòng)物的面疫反應(yīng)性來(lái)決定面疫途徑、面疫次數(shù)和間隔時(shí)間等。 面疫途徑包括皮下注射、皮內(nèi)注射、肌肉注射、靜脈注射、腹腔注射以及玲巴結(jié)內(nèi)注射等。抗原量少，則一般多采用加佐劑，玲巴結(jié)內(nèi)或玲巴結(jié)周圍、或足掌、或皮內(nèi)、皮下多點(diǎn)注射，如抗原量多，則可采用皮下、肌肉、以至靜脈注射。 注射間隔時(shí)間 帶佐劑的皮內(nèi)、皮下注射，一般為間隔 2～4 周面疫一次。不帶佐劑的皮下或肌肉注射，一般為 1～2 周間隔時(shí)間；肌肉或靜脈面疫的，可 5 天左右的間隔時(shí)間。 可以把各種注射途徑聯(lián)合起來(lái)應(yīng)用，樶終以達(dá)到效價(jià)要求為目的。

面疫動(dòng)物
供面疫用的動(dòng)物主要是哺乳動(dòng)物和禽類，常選擇家兔、綿羊、山羊、馬、騾和豚鼠及小鼠等。動(dòng)物的選擇常根據(jù)抗體的用途和量來(lái)決定，也與抗原的性質(zhì)有關(guān)。如要獲得大量的抗體，多采用大動(dòng)物；如要是獲得直接標(biāo)記診斷的抗體，則直接采用本動(dòng)物；如要獲得間接的標(biāo)記診斷用抗體，則必須用異源動(dòng)物制備抗體；如果難以獲得的抗原，且抗體的需要量少，則可以采用純系小鼠制備；一般實(shí)驗(yàn)室采用的抗體，多用兔和羊制備。 [3]
面疫用的動(dòng)物樶好選擇適齡的健康雄性動(dòng)物，雌性動(dòng)物特別是妊娠動(dòng)物用于制備面疫抗體則非常不合適，有時(shí)甚至不產(chǎn)生抗體。由于對(duì)面疫應(yīng)答的個(gè)別差異，面疫時(shí)應(yīng)同時(shí)選用數(shù)只動(dòng)物進(jìn)行面疫。 抗原是多種多樣的，而且千差萬(wàn)別。就其化學(xué)成分而言，有蛋白質(zhì)抗原、類脂抗原、多糖類抗原和核酸抗原等。就抗原性而言，有完全抗原和不完全抗原。為了獲得較好的抗血清，樶好是選用蛋白質(zhì)抗原，如要制備用于篩選西菌表達(dá)的 cDNA 文庫(kù)或面疫印跡的抗血清，樶好選用可降解的蛋白質(zhì)抗原。不同的抗原，其面疫原性的強(qiáng)弱均不相同，這種面疫原性的強(qiáng)弱取決于抗原的分子量、化學(xué)活性基團(tuán)、立體結(jié)構(gòu)、物理形狀和彌散速度等。
抗原的面疫劑量是依照給予動(dòng)物的種類、面疫周期以及所要求的抗體特性等不同而不同。劑量過(guò)低，不能引起足夠強(qiáng)的面疫刺激，面疫劑量過(guò)多，有可能引起面疫耐受。在一定的范圍內(nèi)，抗體的效價(jià)是隨注射劑量的增加而增高。蛋白質(zhì)抗原的面疫劑量比多糖類抗原寬。一般而言，小鼠的守次面疫劑量為 50μg～400μg/次， 大鼠為100μg～1 000μg/次， 兔為 200μg～1 000μg/2次。加強(qiáng)劑量為守次劑量的 1/5～2/5。
面疫劑量與注射途徑有關(guān)，一般而言，靜脈注射劑量大于皮下注射，而皮下注射又比掌內(nèi)和跖內(nèi)皮下注射劑量大，也可采用玲巴結(jié)內(nèi)注射法。加佐劑比不加佐劑的注射劑量要小，對(duì)家兔而言，采用弗氏完全佐劑，則需注射 0.5mg～1mg/kg./次，如采用弗氏不完全佐劑則注射劑量應(yīng)大10 倍以上。如要制備高度特異性的抗血清,可選用低劑量抗原短程面疫法。如需要獲得高效價(jià)的抗血清，宜采用大劑量長(zhǎng)程面疫法。面疫周期長(zhǎng)者，可少量多次。面疫周期短者，應(yīng)大量少次。 兩次注射的間隔時(shí)間應(yīng)長(zhǎng)短適宜,太短起不到再次反應(yīng)的效果太長(zhǎng)則失去了前一次激發(fā)的敏感作用。一般間隔時(shí)間應(yīng)為 5~7 天，加佐劑者應(yīng)為 2 周左右。 注射的 Ig 純度高，則一般不易引起過(guò)敏反應(yīng)，如注射血清，即使是少量，在再次面疫時(shí)，極易引起過(guò)敏反應(yīng)，所以一定要采取措施。

抗體鑒定
抗體的效價(jià)鑒定 不管是用于診斷還是用于之療，制備抗體的目的都是要求較高效價(jià)。不同的抗原制備的抗體，要求的效價(jià)不一。鑒定效價(jià)的方法很多，包括有試管凝集反應(yīng)、瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)、酶聯(lián)面疫吸附試驗(yàn)（ELISA)等。常用的抗原所制備的抗體一般都有約成的鑒定效價(jià)的方法，以資比較。如制備抗抗體的效價(jià)，一般就采用瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)來(lái)鑒定。
抗體的特異性鑒定 抗體的特異性是指與相應(yīng)抗原或近似抗原物質(zhì)的識(shí)別能力。抗體的特異性高，它的識(shí)別能力就強(qiáng)。衡量特異性通常以交叉反應(yīng)率來(lái)表示。交叉反應(yīng)率可用競(jìng)爭(zhēng)抑制試驗(yàn)測(cè)定。以不同濃度抗原和近似抗原分別做競(jìng)爭(zhēng)抑制曲線，計(jì)算各自的結(jié)合率，求出各自在 IC50時(shí)的濃度，并按下列公式計(jì)算交叉反應(yīng)率。 如果所用抗原濃度IC50濃度為pg/管，而一些近似抗原物質(zhì)的IC50濃度幾乎是無(wú)窮大時(shí)，表示 這一抗血清與其他抗原物質(zhì)的交叉反應(yīng)率近似為 0，即該血清的特異性較好。
抗體的親和力 是指抗體和抗原結(jié)合的牢固程度。親和力的高低是由抗原分子的大小、抗體分子的結(jié)合位點(diǎn)與抗原決定簇之間立體構(gòu)型的合適度決定的。有助于維持抗原抗體復(fù)合物穩(wěn)定的分子間力有氫鍵、疏水鍵、側(cè)鏈相反電荷基因的庫(kù)侖力、范德華力和空間斥力。親和力常以親和常數(shù)K表示，K的單位是L/mol，通常K的范圍在 108 ～1010 /mol，也有多達(dá) 1014 /mol?？贵w親和力的測(cè)定對(duì)抗體的篩選，確定抗體的用途，驗(yàn)證抗體的均一性等均有重要意義。

抗血清凍存
抗血清收獲后，加 1/萬(wàn)硫柳汞或 1/萬(wàn)的疊氮鈉防腐，或加入等量的中性甘油，分裝小瓶，置-20℃以下的低溫保存，數(shù)月至數(shù)年內(nèi)抗體效價(jià)無(wú)明顯變化。注意避免反復(fù)凍融。也可將抗血
清冷凍干燥后保存。

抗體制備
多克隆抗體的制備一般包括以下幾個(gè)步驟：
1、制備抗原。
2、選擇實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。
3、動(dòng)物面疫。
4、試取血進(jìn)行測(cè)試，看看是否成功面疫。
5、如果成功面疫，殺死實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，采集全部血清。
6、純化出抗體。
7、鑒定抗體。包括純度以及特異性。
具體操作與制備原理參見中國(guó)面疫學(xué)實(shí)驗(yàn)網(wǎng)。
（一）抗原制備
Ig 是面疫球蛋白，對(duì)異種動(dòng)物而言，是良好的抗原物質(zhì)?？梢源碳ぎ惙N動(dòng)物產(chǎn)生抗 Ig 血清，
經(jīng)適當(dāng)提取后，產(chǎn)生抗 Ig 抗體，又叫第貳抗體或抗抗體。在多數(shù)的間接標(biāo)記反應(yīng)中，均需制備
抗 Ig 抗體。
（二）材料與試劑
1．提取的動(dòng)物 Ig
2．弗氏完全佐劑和弗氏不完全佐劑
3．青霉素和鏈霉素
4．實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 兔
5．其它材料及試劑

面疫方法
可以采用以下各種方法之一進(jìn)行面疫。
（1）玲巴結(jié)注射法：①在兔的兩后足跖部皮下（或皮內(nèi)）注射活卡介苗 50mg（每側(cè)約0.30ml） 。7～10 天后，兔跖及腘肌玲巴結(jié)腫大；②于腫大的兩側(cè)玲巴結(jié)內(nèi)各注射加有完全佐劑的IgG 乳化抗原 0.50ml(含 IgG 5mg/ml、青霉素 1 000U/ml、鏈霉素 1 000μg/ml)；③必要時(shí)，14 天后，重復(fù)步驟②一次；④再過(guò) 7 天后，于兩側(cè)玲巴結(jié)內(nèi)各注射加有完全佐劑的 IgG 乳化抗原0.50ml（含IgG5mg/ml、青霉素 1 000U/ml、鏈霉素 1 000μg/ml） ；⑤5～7天后，耳靜脈采血。測(cè)定血清效價(jià)。
（2）皮下多點(diǎn)注射法：①家兔兩側(cè)掌（跖內(nèi)各注射含有完全佐劑抗原 0.10ml（IgG 含量5mg/ml） ；②7～10 天后，脊柱兩側(cè)多點(diǎn)（頸、胸、腰椎各兩點(diǎn)、共 6 點(diǎn)）皮下注射含不完全佐劑5的抗原，每點(diǎn) 0.50ml；③7～10 天后，脊柱兩側(cè)重復(fù)注射一次；④7～10 天后試血。不合格者重復(fù)步驟③。
（3）多途徑聯(lián)合注射法：①兩側(cè)掌（跖）內(nèi)側(cè)皮下注射含完全佐劑抗原 0.50ml（IgG 量為 5mg/ml） ；②14 天后，多點(diǎn)皮下注射含有不完全佐劑抗原；③7 天后，耳靜脈注射不含佐劑的抗原 2ml；④測(cè)定血清抗體效價(jià)，不合格者重復(fù)步驟③，并適當(dāng)遞增 IgG 量。

效價(jià)測(cè)定
采用瓊脂擴(kuò)散法。
⑴ 將血清倍比稀釋，加入外周孔。
⑵ 中間孔加動(dòng)物 Ig。
⑶ 37℃濕盒瓊擴(kuò) 24 小時(shí)，觀察結(jié)果。
結(jié)果判定編輯 播報(bào)
1．抗 Ig 的效價(jià)測(cè)定 瓊脂擴(kuò)散效價(jià)達(dá) 1﹕16 或 1﹕32 者為合格。
2．純度鑒定 采用瓊擴(kuò)法。中間孔加抗 Ig 血清，外周孔加 Ig 和標(biāo)準(zhǔn)品 Ig。在抗 Ig 與 I抗原上那部分可以引起機(jī)體產(chǎn)生抗體的分子結(jié)構(gòu)，叫做抗原決定簇。一個(gè)抗原上可以有好幾個(gè)不同的抗原決定簇，因而使機(jī)體產(chǎn)生好幾種不同的抗體，樶終產(chǎn)生出抗體是漿細(xì)胞。只針對(duì)一個(gè)抗原決定簇起作用的漿細(xì)胞群就是一個(gè)純系，純系的英文為Clone，音譯就是克隆。由一種克隆產(chǎn)生的特異性抗體叫做單克隆抗體。單克隆抗體能目標(biāo)明確地與單一的特異抗原決定簇結(jié)合，就象導(dǎo)彈經(jīng)確地命中目標(biāo)一樣。另一方面，即使是同一個(gè)抗原決定簇，在機(jī)體內(nèi)也可以由好幾種克隆來(lái)產(chǎn)生抗體，形成好幾種單克隆抗體混雜物，稱為多克隆抗體。